학술자료

새로운 배지로 전환하는 과정에서 배양 중 생존 가능성을 증진시키기 위한 팁

종종 기존에 사용하던 배지로부터 다른 회사의 배지로 바꾸는 과정에서, 세포의 생활성과 Viable Cell Denstiy (VCD) 가 떨어집니다. 그 이유는 세포가 새로운 환경이
노출이 되면서 이 환경에 적응하는 데에 시간이 필요하기 때문입니다. ‘CELLiST cell adapation guidelines’에서 추천하는 적응 과정은 새로운 배지로
문제없이 적응하도록 도움을 드릴 것입니다. 그러나 낮은 세포 생활성 문제가 여전히 나타난다면, 여기에서 제안 해 드리는 몇 가지 제안들이 문제 해결에
도움이 될 수 있습니다:

1) 회복을 위한 계대 배양 (액체 질소 탱크로부터 세포를 해동하여 기존 배지를 사용하여 배양 및 계대)을 여러 번 진행 하십시오. 새로운 배지에 대한 적응을 시작하기
전에, 기존 배지로 3-4 번의 계대 배양을 진행 하는 것이 좋습니다. 이 과정을 통해 세포가 액체 질소 환경의 초저온에서 회복할 수 있습니다.

2) 순차적인 적응 과정에서 몇 가지 과정을 더 추가하십시오. 예를 들어, 90%:10% (기존 배지: 새로운 배지)으로 시작하셔서 75%:25%, 50%:50%, 25%:75%, 10%:90%, 그리고 0%:100% 순으로 진행하십시오. 구체적으로, 급작스럽게 생활성이 낮아지는 단계를 식별하고, 그 스텝 이전에 추가적인 적응 단계를 더
추가하는 것이 중요합니다.

3) 성장 인자의 첨가: 세포 접종 직전에 50 ug/L of IGF-1 (LONG-R3) 혹은 5 mg/L Insulin 을 새로 준비한 배지에 첨가 해 주시는 것은 배지 전환 도중 세포의
생활성을 높이는 데에 도움이 됩니다.

4) 2-6 mM 의 Glutamine 을 첨가하는 것을 권장 해 드립니다 (GS 세포주의 경우에도 권장).

5) 기존에 사용하던 배지가 특정 세포주에게 요구되는 필수 성분을 포함하고 있는지를 확인하십시오. 포함한 경우에는, 전환하려고 하는 배지에도 따로 첨가해 주셔야
합니다.

6) 마지막으로, 항상 pH 가 미치는 영향을 고려해야 합니다: 적응 과정 중에서, 기존 배지와 새로운 배지의 혼합 배지를 제조 시, pH 가 변화할 수 있습니다. 항상 세포 접종 이전에 배지의 pH 가 일정하게 6.8-7.2 내에 있도록 유지하는 것이 중요합니다.